技术概述

提供真核和原核蛋白表达纯化服务,支持各种标签蛋白的制备,为后续功能研究和互作分析提供高质量蛋白样品。

技术平台

  • 原核表达系统(E. coli):适合大多数蛋白,表达量大,成本低
  • 昆虫细胞表达系统(Baculovirus):适合需要翻译后修饰的蛋白
  • 哺乳动物细胞表达系统:适合复杂蛋白和膜蛋白

实验流程

  • 1. 基因克隆与表达载体构建
  • 2. 表达系统筛选与条件优化
  • 3. 小量表达测试与可溶性分析
  • 4. 大量表达与蛋白纯化
  • 5. 质量控制(SDS-PAGE、MS、浓度测定)

标签选择

  • His 标签:金属亲和层析,操作简便
  • GST 标签:谷胱甘肽亲和层析,提高可溶性
  • MBP 标签:麦芽糖结合蛋白,显著提高可溶性
  • Flag/HA 标签:免疫亲和层析,适合真核表达

应用领域

  • 结构生物学研究(晶体学、NMR、Cryo-EM)
  • 分子互作分析(SPR、ITC、MST)
  • 酶学性质研究
  • 抗体免疫原制备
蛋白纯化

相关文献解读

蛋白表达系统的选择策略

不同表达系统各有优劣,原核系统适合大多数蛋白且成本低,真核系统适合需要翻译后修饰的蛋白。根据蛋白特性选择合适的表达系统是成功的关键。

Nat Rev Mol Cell Biol. 2019;20(5):286-302

重组蛋白纯化策略优化

选择合适的亲和标签和纯化策略对获得高质量蛋白至关重要。标签选择需考虑蛋白特性、下游应用和是否需要去除标签等因素。

Methods Enzymol. 2021;647:1-32

文献解读

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