DSF 差示扫描荧光法：蛋白质稳定性高通量分析

技术原理

差示扫描荧光法（Differential Scanning Fluorimetry, DSF）基于荧光信号随蛋白质构象变化的响应特性，通过监测升温过程中蛋白质的去折叠行为，精准测定其热稳定性参数。

检测模式

1. 外源染料法（常用）：采用SYPRO Orange等环境敏感型疏水荧光染料。天然状态下，蛋白质疏水核心被包裹，染料游离于溶液中，荧光信号极弱；温度升高时，蛋白质发生去折叠，疏水区域暴露，染料特异性结合疏水位点，荧光信号显著增强。

2. 内源荧光法（无标记）：利用蛋白质自身色氨酸、酪氨酸的内源荧光特性。天然构象中，色氨酸位于疏水核心，荧光发射峰约330 nm；去折叠后暴露于亲水环境，发射峰红移至350 nm。

核心优势

• 高通量高效：单次可完成数百个样品检测，实验效率较传统技术提升10–50倍
• 低耗经济：样品消耗量仅为传统技术的1/10–1/50，无需昂贵耗材
• 操作简便：无需复杂样品前处理，兼容常规qPCR仪
• 兼容性强：可在复杂生物体系中直接检测，无需蛋白纯化

应用场景

1. 蛋白质热稳定性分析：野生型/突变体稳定性筛选、缓冲液/辅料优化、制剂配方筛选
2. 小分子-蛋白互作：药物筛选、靶点验证、先导化合物优化、结合特异性评估
3. 蛋白-蛋白/核酸互作：复合物稳定性分析、结合位点验证、功能机制研究
4. 抗体药物评估：抗体稳定性、辅料筛选、聚集风险评估、一致性评价